原代細胞的培養方法

原代細胞的培養方法

1、組織塊培養法

(1)按照前述方法取材，將組織剪成或切成1mm3大小的小塊，并加入少許培養基使組織濕潤。

(2)將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊間距0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培養瓶(底面積為17.5cm2)可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉培養瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內加入適量培養基蓋好瓶塞,將瓶傾斜放置在37℃溫箱內。

(3)培養2~4小時，待小塊貼附后，將培養瓶緩慢翻轉平放，靜置培養，動作要輕，嚴禁搖動和來回振蕩，以防由于沖動而使小塊漂起而造成培養失敗，若組織塊不易貼壁可預先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。開始培養時培養基不宜多，以保持組織塊濕潤即可，培養24小時后再補液，培養初期移動和觀察時要輕拿輕放，開始幾天盡量不去搬動，以利貼壁和生長，培養3~5天時可換液，一方面補充營養，一方面去除代謝產物和漂浮小塊所產生的毒性作用。

2.消化培養法

該方法是采用前述的消化分散法，將妨礙細胞生長的細胞間質（包括基質、纖維等）

去除，使細胞分散形成細胞懸液，然后分瓶培養。

原代細胞的培養方法

3.懸浮細胞培養法：對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞、**細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和**細胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養，或經**細胞分層液分離后接種培養。

原代細胞的培養方法

原代細胞的培養方法