細胞的復蘇與凍存

細胞的復蘇與凍存
細胞復蘇：指將凍存的細胞解凍之后重新培養，細胞恢復生長的過程。

復蘇過程如下圖所示：

常見問題解答：

Q：為什么細胞復蘇后，很多難以貼壁?

A：忽略培養基的問題，主要考慮細胞凍存時狀態差或者復蘇時動作太慢導致細胞死亡。切記融化速度要快，可不時搖動冷凍管，使之盡快通過易受損的溫度段(-5～0℃)。

Q：為什么細胞貼壁了，卻長不起來?

A：此時需要考慮的是細胞密度問題，一些細胞傾向于維持一定的密度，若復蘇的細胞生長緩慢，可將細胞轉移到較小的培養瓶/皿中培養。

細胞凍存：將細胞放在低溫環境(-70℃~-196℃)，細胞內的代謝降低，可*大限度的保存細胞活力，以便長期儲存。

常見問題解答：
Q：目前細胞凍存液多采用的什么配方?

A：目前細胞凍存液的配方有很多種，如培養基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 這里小秋推薦使用HAKATA無血清細胞凍存液，無需程序降溫，細胞存活率和活力高達90%-98%，適用于干細胞凍存及無血清培養細胞。

Q：若沒有細胞凍存盒，我們該怎么辦?

A：可先將凍存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或過夜，*后放入液氮罐內。為了節約時間，還可直接在凍存盒外包裹一團棉花，用棉花代替凍存盒緩慢降溫的特點，將細胞轉移至-80℃冰箱過夜，再轉移至液氮保存。

Q：細胞凍存時對細胞量有要求嗎?

A：細胞復蘇時會有一定的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，起始濃度106—107個/ml/管;